黄色秋葵视频bio-rad轉印槽的使用方法步驟:
全程請戴手套操作,以免汙染黄色秋葵视频bio-rad轉印槽!
1)電泳後SDS-PAGE 膠片浸在轉印緩衝液中,洗2~3 次,每次10min.
2)取出黄色秋葵视频bio-rad轉印槽,先小心放一攪拌子在底部,再倒一半轉印緩衝液。
3)取轉印紙切成約如膠片大小,先在方形培養皿中以少許甲醇浸濕數秒鍾,再置入黄色秋葵视频bio-rad轉印槽中的緩衝液10 min 後使用。 另取兩張濾紙,以及兩片方形海綿墊,都放在黄色秋葵视频轉印槽的緩衝液中備用。
4)取出轉印夾打開平放,先墊一張方形海棉墊,鋪上一張濕濾紙,小心平鋪SDS-PAGE膠上去,然後小心迭上已潤濕的轉印紙,用塗菌玻璃棒趕出氣泡;轉印紙再滴上數滴緩衝液後,加蓋一層濾紙,及另一張海綿,也都不可陷入氣泡,即可把整個轉印三明治卡夾裝好。
膠迭到轉印紙時,一次成功,不要重作,否則蛋白質色帶可能會印上去,產生重迭影像。
5)將轉印三明治置入已經放有一半轉印緩衝液的黄色秋葵视频bio-rad轉印槽中,注意有轉印紙的那一麵向正極(紅色),膠片那麵向負極(黑色)。
6)當三明治都放入黄色秋葵视频bio-rad轉印槽後,以轉印緩衝液蓋滿所有的三明治,小心動一動卡夾,除去附在卡夾內外的氣泡,蓋上蓋子,放到一攪拌器上,打開攪拌器開始攪拌,同時接好電源,裝置完成後放置10 min.
7)以300mA開始轉印,溫度會漸漸上升,轉印1.5 h左右 後中止轉印,取出轉印三明治,打開後依次取出轉印紙及膠。
具體轉印條件要根據蛋白的大小進行優化,注意低溫。
8)轉印後的膠片可以繼續進行染色,看有無蛋白質殘留。若電泳時加有藍色標準蛋白質marker(SeeBlue),則可在轉印紙上看到藍色的色帶,確定轉印成功,並可評估轉印效率。